INVESTIGACION ADICIONAL EN LA TECNICA DIG-ELISA: UN NUEVO PUNTO FINAL EN ELISA

(especial para SIIC © Derechos reservados)
Esta nueva versión de ELISA es recomendable para los laboratorios que tienen un bajo presupuesto y que no necesitan una medida muy precisa de la concentración de anticuerpos.
vidalgo9.jpg Autor:
José Vidal gómez,
Columnista Experto de SIIC
Artículos publicados por José Vidal gómez,
Recepción del artículo
27 de Febrero, 2004
Primera edición
28 de Mayo, 2004
Segunda edición, ampliada y corregida
7 de Junio, 2021

Resumen
Se describe una nueva forma de medir la concentración de anticuerpos mediante la técnica ELISA. En el nuevo procedimiento, el punto final está determinado por la intensificación del color que tiene lugar cuando los pocillos de una placa de ELISA, que contienen anticuerpos, se revelan mediante la enzima peroxidasa y el sustrato diaminobencidina-níquel, con intensificación posterior del color con plata: A medida que disminuye la concentración de anticuerpos (y por tanto de peroxidasa), en una dilución seriada, el color se torna cada vez más débil hasta que se intensifica de nuevo y después se desvanece (cuando la concentración de anticuerpo es muy baja). La dilución a la que ocurre la intensificación del color se puede utilizar como una medida de la concentración de anticuerpos y, de esta manera, las concentraciones de las muestras problema se pueden calcular si se incluye una muestra estándar de concentración conocida: el cociente (factor de dilución de la muestra problema / factor de dilución de la muestra estándar) refleja la relación (concentración de anticuerpos en la muestra problema / concentración de anticuerpos en la muestra estándar). En este artículo se confirma la validez y la precisión del procedimiento propuesto.

Palabras clave
ELISA, plata, diaminobencidina, poli (lisina, fenilalanina), medida de anticuerpos


Artículo completo

(castellano)
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Abstract
This report describes a new procedure to measure the antibody concentration by ELISA. The new procedure is based on the color intensification that took place when ELISA plates containing antibodies were revealed with peroxidase and diaminobenzidine-nickel and further intensification with silver: In a serial dilution, as the antibody concentration (and therefore peroxidase concentration) decreased, the color intensity decreased and later increased again to vanish finally at the highest antibody dilutions. It is proposed that the dilution at which the color intensified can be used as a measure of the sample antibody content; because the quotient (dilution factor of problem sample / dilution factor of reference sample) equals the quotient (antibody concentration in sample / antibody concentration in reference sample), inclusion of a sample of known concentration allows the estimation of the concentration in other samples. This report verifies the validity and precision of the new procedure.

Key words
ELISA, silver, diaminobenzidine, poly(lysine, phenylalanine), antibody measurement.


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Especialidades
Principal: Diagnóstico por Laboratorio
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Bibliografía del artículo
  1. Elwing H, Lange S, Nygren H. Diffusion-in-gel enzyme-linked immunosorbent assay (DIG-ELISA): optimal conditions for quantitation of antibodies. J Immunol Methods 1980; 39: 247-256.
  2. Vidal J. Improvements to the enzyme-developed radial immunodiffusion technique. J Immunol Methods 2002; 270: 163-170.
  3. Lewis WHT, Sun KKY. Specific antigen detection by immunoelectroendosmosis. Electrophoresis 1988; 9: 354-355.
  4. Abelev GI, Karamova ER, Lazarevich NL, Kiseleva VI, Poverenny AM. Electrochromatography: a method for automatic immunoaffinity chromatography on porous membranes. Immunol Letters 1994; 40: 133-138.
  5. Malvano R, Boniolo A, Dovis M, Zannino M. ELISA for antibody measurement: Aspects related to data expression. J Imunol Methods 1982; 48: 51-60.
  6. Hornbeck P. 1991. Assays for antibody production. In Current Protocols in Immunology, vol. 1. J.E. Coligan, A.M. Kruisbeek, D.H. Margulies, E.M. Shevach, and W. Strober, editors. Wiley, New York. 2.1.1-2.1.22.
  7. Frigo B, Scopsi L, Patriarca C, Rilke F. Silver enhancement of nickel-diaminobenzidine as applied to single and double immunoperoxidase staining. Biotech & Histochem 1991; 66: 159-167.
  8. Ludány A, Gallyas F, Gaszner B, Andrásfalvy B, Szücs G, Kellermayer M. Skimmed-milk blocking improves silver post-intensification of peroxidase-diaminobenzidine staining on nitrocellulose membrane in immunoblotting. Electrophoresis 1993; 14: 78-80.
  9. Hobbs RN. Solid-phase immunoassay of serum antibodies to peptides. Covalent antigen binding to adsorbed phenylalanine-lysine copolymers. J Immunol Methods 1989; 117: 257-266.
  10. Davies C. 2001. Concepts. In The immunoassay handbook, 2nd edition. D. Wild, editor. Nature Publishing Group, London, 78-107.
  11. Smeenk R. 1986. A comparison of four different anti-DNA assays. In Immunoassay technology, vol.2. S.B. Pal, editor. Walter de Gruyter, Berlin, 145-166.
  12. Hong CS, Stadler BM, Wälti M, De Weck AL. Dot -immunobinding assay with monoclonal anti-IgE antibodies for the detection and quantitation of human IgE. J. Immunol. Methods 1986; 95: 195-202.
  13. Jol-Van der Zijde CM, Labadie J, Vlug A, Radl J, Vossen JM, Van Tol MJD. Dot -immunobinding assay as an accurate and versatile technique for the quantification of human IgG subclasses. J. Immunol. Methods 1988; 108: 195-203.

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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