EFFECT OF A NOVEL SOMATOSTATIN ANALOGUE COMBINED WITH CYTOTOXIC DRUGS ON HUMAN TUMOUR XENOGRAFTS AND METASTASIS OF B16 MELANOMA

Abstract
The somatostatin analogue TT-232 with no endocrine effect has been shown to be a potent inducer of apoptosis in cancer cell cultures and tumours growing in mice. Its action is mediated by short term induction of tyrosine phosphatases and inhibition of tyrosine-kinases. In one of our recent studies the growth of HT-18 human melanoma and HT-58 human lymphoma xenografts were treated with 1 mg/kg/day s.c. TT-232 monotherapy as well as with the combination of 1 mg/kg/day TT-232 plus 30 and 60 mg/kg/day i.p. Dacarbazine as well as 5 and 10 mg/kg/day i.v. Etoposide, respectively. Significant, 63% inhibition of HT-18 melanoma was achieved by combination of either 30 or 60 mg/kg Dacarbazine and 1 mg/kg TT-232. The growth of HT-58 lymphoma was inhibited significantly by 1 mg/kg TT-232, 5 and 10 mg/kg Etoposide monotherapy and by combination of 1 mg/kg TT-232 with 5 or 10 mg/kg Etoposide. The inhibition was higher in case of combination therapy compared to monotherapies. The metastatic capacity of B16 mouse melanoma was significantly reduced by combination of 1 mg/kg/day s,c, TT-232 and 30 or 60 mg/kg/day i.p. Dacarbazine. These data indicate that TT-232 may be a useful component in combination therapy of melanomas and lymphomas.

Key words
TT-232, cytostatic, human tumour xenografts

Artículo completo
Introducción
Nuestro grupo estudió el TT-232, un nuevo análogo de la somatostatina que posee una estructura en anillo formada por cinco residuos (D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Cys-Thr-NH₂), por su actividad antiproliferativa. El TT-232 tuvo un efecto antitumoral potente in vivo e in vitro.
En una amplia variedad de líneas celulares cancerosas in vitro y en modelos animales realizados in vivo, este agente mostró ser un inductor fuerte de la apoptosis. Por otro lado, no parece producir los efectos endocrinos del compuesto natural.¹ El péptido actúa a través de la inducción de corta duración de las tirosina fosfatasas y por la inhibición de las tirosina quinasas; es más probable que estos dos efectos sean independientes entre sí.^2,3
Los datos sobre estudios realizados in vitro demostraron la selectividad del TT-232 referente a su actividad antitumoral; no se hallaron señales de toxicidad aun cuando se emplearon dosis que excedieron la dosificación terapéutica.^1,4,5,6
Los análogos de la somatostatina podrían ser útiles en el tratamiento de tumores en los seres humanos, en especial en combinación con otras drogas antitumorales ampliamente utilizadas.
Para estudiar su potencial terapéutico, en nuestros experimentos que aquí presentamos, empleamos dos líneas tumorales humanas diferentes en xenoinjertos y dos agentes antineoplásicos en combinación con TT-232.
Materiales y métodos
Se emplearon ratones machos CBA de 8 semanas de vida y criados en cautiverio a los cuales se les aplicaron xenoinjertos de tumores humanos; y ratones machos CBA C₅₇Bl/₆ de la misma edad y criados de igual forma para la inoculación de melanoma B16.
La línea celular del melanoma maligno humano HT-18 (ATCC CCL 121); se obtuvo de NIH/NCI, Bethesda, Maryland, Estados Unidos; la línea celular del linfoma humano de células B HT-58 se desarrolló en nuestro departamento.
En los ratones inmunodeprimidos se inocularon por vía subcutánea 2x10⁶ células cultivadas en fase logarítmica.
Se realizó timectomía por succión a los ratones machos CBA de 8 semanas de vida. Ocho días más tarde, se administraron 6 Gy de irradiación corporal total, seguidos de trasplante homólogo de médula ósea dentro de las 24 horas posteriores. Al vigésimo tercer día luego de la timectomía, se inocularon 2x10⁶ células tumorales por vía subcutánea.
El TT-232 es el producto de nuestro laboratorio.
Se obtuvo DTIC (dacarbazina) de Lachema, Brno, República Checa.
El etopósido a fue comprado a EVA, Haarlem, Países Bajos.
Esquema de tratamiento
Experimento 1. Melanoma HT-18, tratamiento con TT-232. El tratamiento con 0.2 a 1.5 mg/kg/d de TT-232 comenzó en el trigésimo primer día posterior a la timectomía y se aplicó diariamente en alícuotas de 0.2 ml por vía subcutánea.
Experimento 2. Melanoma HT-18, tratamiento con TT-232 y DTIC). El tratamiento con TT-232 (1 mg/kg peso corporal) comenzó en el trigésimo primer día posterior a la timectomía. La administración de DTIC comenzó el mismo día que la de TT-232. La dosis diaria de DTIC fue de 30 y 60 mg/kg de peso corporal y se administró por vía intraperitoneal. Se estudiaron los siguientes grupos de 10 animales: control (tratado con bolo intravenoso de solvente); TT-232 (1 mg/kg); DTIC (30 mg/kg); DTIC (60 mg/kg); TT-232 (1 mg/kg) + DTIC (30 mg/kg), y TT-232 (1 mg/kg) + DTIC (60 mg/kg).
El peso corporal se determinó en forma regular. Los experimentos fueron terminados al día 53º mediante exanguinación bajo anestesia con nembutal. Se registraron el peso y la masa corporal.
Experimento 3. Melanoma B-16, tratamiento con TT-232 y DTIC. Las células del melanoma B-16 se inocularon por vía intramuscular. El tratamiento se comenzó 24 horas después de la inoculación y se repitió diariamente hasta el vigésimo día. El experimento se terminó mediante la exanguinación bajo anestesia. Para la fijación del tejido pulmonar se empleó fijador de Bouin y se realizó el recuento de metástasis pulmonares. Se utilizaron las siguientes alícuotas de 0.2 ml: TT-232 1 mg/kg, DTIC 30 mg/kg de peso corporal por vía intraperitoneal, DTIC 60 mg/kg. Se formaron los siguientes grupos: TT-232 (1 mg/kg); DTIC (30 mg/kg); DTIC (60 mg/kg); TT-232 (1 mg/kg) + DTIC (30 mg/kg); TT-232 (1 mg/kg) + DTIC (60 mg/kg).
Experimento 4. Linfoma HT-58, tratamiento con TT-232 y etopósido. El tratamiento con 1 mg/kg de peso corporal con TT-232 comenzó en el día 27º posterior a la timectomía. La administración de etopósido se inició en el mismo día, y la dosis fue de 5 y 10 mg/kg de peso corporal, las cuales se administraron diariamente por vía intravenosa. Se conformaron los siguientes grupos: control (tratado por vía subcutánea con solvente solo); TT-232 (1 mg/kg); etopósido (5 mg/kg); etopósido (10 mg/kg); TT-232 (1 mg/kg) + etopósido (5 mg/kg); TT-232 (1 mg/kg) + etopósido (10 mg/kg).
Resultados y conclusión
Experimento 1
El TT-232 inhibió el crecimiento de los xenoinjertos de melanoma humano HT-18. La inhibición más potente se observó luego de la administración de 5 mg/kg de TT-232. La dosis de 1 mg/kg se seleccionó para los experimentos en los cuales TT-232 se aplicó en combinación con otros compuestos.
Experimento 2
Los resultados de los experimentos 2, 3 y 4 se resumen en la tabla 1.a.b.c. La combinación de TT-232 con DTIC provocó un efecto más potente comparado con TT-232 o DTIC como monoterapia (tabla 1.a).



Experimento 3
El número de metástasis pulmonares se redujo de manera notable en los animales tratados con TT-232 en comparación con los controles. Este efecto igualó al de la dosis de 60 mg/kg de DTIC, mientras que 30 mg/kg de la misma droga no resultaron efectivos. Cuando el TT-232 se combinó con 30 o 60 mg/kg de DTIC, el número de metástasis disminuyó a un valor significativamente menor en comparación al de los controles (tabla 1.b).



Experimento 4
Pudo lograrse cerca de un 50% de inhibición del crecimiento tumoral con el tratamiento con 1 mg/kg de TT-232. El etopósido en dosis de 5 mg/kg provocó un efecto similar y la combinación de 1 mg/kg de TT-232 y la dosis de 5 mg/kg de etopósido fue significativamente más efectiva que la de los tratamientos con TT-232 o etopósido solos. El empleo de 10 mg/kg de etopósido como único agente inhibió el crecimiento tumoral con mucha intensidad, pero dicho efecto pudo incrementarse aún más con la combinación de 10 mg/kg de etopósido y 1 mg/kg de TT-232 (tabla 1.c).



Nuestros experimentos mostraron que aun la monoterapia con TT-232 inhibió de forma significativa el crecimiento del melanoma HT-18. El empleo de TT-232 junto con DTIC provocó un efecto antiproliferativo significativo. El número de metástasis pulmonares del melanoma B16 pudo disminuirse a un valor inferior que en los controles mediante el uso de TT-232 más DTIC. Se registraron resultados similares cuando los ratones con linfoma HT-58 recibieron TT-232 solo o en combinación con etopósido. La dosis de 1 mg/kg de TT-232 demostró ser menos efectiva que la de 5 mg/kg, pero fue elegida para los estudios con combinaciones de agentes para descubrir si el efecto marginal provocado por esta dosificación pudo potenciarse con el agregado de otros compuestos.
La combinación de compuestos anticancerosos con mecanismos de acción diferentes se utiliza ampliamente para la terapéutica de las neoplasias. Debido a que la quimioterapia del melanoma maligno y de los linfomas todavía no está resuelta, son necesarias nuevas modalidades de tratamiento. Nuestros experimentos indican que el TT-232 podría emplearse con éxito en la quimioterapia combinada para melanomas y linfomas.
Los autores no manifiestan “conflictos de interés”.

Bibliografía del artículo

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