Abstract
Recently, we established that the measles virus Ig G4 geometric mean titer (GMT) in natural infection was significantly larger than the IgG₄ GMT detected in posvaccinal immune response [80 (33-191) 95% CI vs. 13 (7-26) 95% CI]. Thus, it could be possible to establish a significant association between Ig G4 antibody titers and probable exposure to measles vaccine (Ig G4 < 40) or wild type measles virus (Ig G4 > 40). The present study was undertaken to differentiate between measles natural and posvaccinal source of infection by the Ig G4 antibody quantification. Methods and materials: Serum samples obtained from vaccinated and natural infected individuals were assay by immunofluorescence for the detection of Ig G4 measles virus specific antibodies during the early phase of infections. Results: All the serum samples obtained from the vaccinated population revealed Ig G4 antibodies titers equal or less than 1/20; in contrast, those samples obtained from natural infected individuals showed Ig G4 titers equal or greater than 1/80. Conclusion: Ig G4 isotype could be used as an early phase quantitative marker to differentiate between natural and posvaccinal immune responses.

Key words
Ig G4 titer, antibody difference source of infection

Artículo completo
Introducción
El sarampión es un virus de distribución mundial sumamente transmisible y su único reservorio es el hombre. La infección por este virus genera una elevadísima carga de morbimortalidad infantil, que se estima en un total de 40 millones de casos anuales en el mundo, un millón de los cuales son fatales.
Debido a la gravedad de las complicaciones asociadas con la infección por sarampión, a la gran transmisibilidad del virus y a la existencia actual de una vacuna a virus vivo atenuado muy efectiva, ésta es una de las enfermedades propuestas por la Organización Mundial de la Salud (OMS) para su control, eliminación y posterior erradicación en las Américas, programa en el que también está involucrado nuestro país. Para un control efectivo y una eventual erradicación es necesario interrumpir la cadena de transmisión del virus natural a través de la vacunación masiva de los grupos etarios más susceptibles, para intentar de este modo alcanzar una tasa de inmunización poblacional no menor al 95%. Asimismo, se debe poner énfasis en los estudios epidemiológicos y de laboratorio, tendientes a conocer la diversidad genética entre el virus vacunal y el natural para asegurar una protección posvacunal elevada; estudiar la respuesta inmune posvacunal en diferentes esquemas de vacunación, e investigar marcadores serológicos en diferentes estadios de la infección con la finalidad de entender la totalidad de la respuesta inmune específica.^1,2 Los marcadores serológicos convencionales (IgM marcador de infección primaria por sarampión, anticuerpos totales: marcador de estado inmune de un individuo), no proporcionan información acerca de la fuente de la infección (virus natural o vacunal). En un trabajo recientemente publicado por nuestro grupo de trabajo³ se estudió comparativamente la cinética de las respuestas inmunes isotípicas inducidas por infecciones del virus sarampión natural y vacunal en las distintas etapas de la infección. Esta investigación arrojó como conclusiones que en la fase temprana de la infección el porcentaje de distribución de los isotipos IgG1, IgG2, IgG3 e Ig G4 fue similar entre una respuesta inmune generada por una infección natural y una posvacunal, los isotipos dominantes fueron IgG1 e Ig G4. Sin embargo, la media geométrica de los títulos de Ig G4 durante la fase temprana de la infección natural fue significativamente mayor que la media geométrica de los títulos de Ig G4 en la respuesta posvacunal (80 vs. 13; 95% IC).
Sobre la base de estos resultados se concluyó que el título de anticuerpos tipo Ig G4 es un marcador serológico que permitiría distinguir en la fase temprana de la infección entre una fuente natural y una posvacunal.
En la búsqueda de la aplicación diagnóstica de este nuevo marcador serológico se seleccionaron sueros de casos confirmados de sarampión y se confrontaron los datos clínicos –epidemiológicos y de serología convencional (IgM antisarampión)– con el título de Ig G4.
El objetivo de este trabajo fue la aplicación diagnóstica de este nuevo marcador para diferenciar retrospectivamente la fuente de la infección en sueros de casos confirmados de sarampión.
Materiales y métodos
Paneles de suero
Grupo 1: se procesaron 6 muestras de suero de individuos con antecedentes de vacunación antisarampionosa obtenidos entre los días 10 y 18 de inicio de la erupción. Estos casos fueron clasificados como posvacunales, teniendo en cuenta el criterio clínico de reacciones adversas dentro de los 18 días posvacunación.
Grupo 2: se procesaron 6 muestras sueros de individuos sin antecedentes de vacunación. Las muestras fueron recolectadas entre los 5 y los 15 días de inicio de la erupción, durante brotes de sarampión en la Argentina. Estos casos fueron clasificados como infección natural.
Los sueros fueron diluidos en solución salina tamponada (factor 2) a partir de la dilución 1/10 hasta el título final. En ambos grupos se detectó IgM específica para virus de sarampión por enzimoinmunoensayo.
Antisueros
Anticuerpos monoclonales de ratón antiisotipos de IgG humana de la marca comercial SIGMA Chemical Co (St. Louis). Las diluciones de los anticuerpos fueron: 1/100 (IgG1), 1/32 (IgG2), 1/32 (IgG3), 1/32 (Ig G4).
Anticuerpo monoclonal de conejo anti-IgM humana y anti-IgG humana de la marca comercial Cappel, usadas en las diluciones 1/100 y 1/150, respectivamente.
Inmunofluorescencia indirecta
Se utilizó el protocolo estándar de inmunofluorescencia indirecta (IFI).⁴ Se consideraron positivas aquellas muestras que revelaran inmunofluorescencia específica localizada en citoplasma o en células gigantes multinucleadas (sincisios) o en ambos. En cada una de las reacciones se incluyeron controles positivos y negativos para IgM antisarampión y los distintos isotipos.
Enzimoinmunoensayo ELISA
Para la deteccción de IgM antisarampión por ELISA⁵ se utilizó el equipo comercial Enzygnost Anti Measles Virus/Ig M Behring (D-35041 Marburg, Alemania). Las muestras fueron ensayadas siguiendo las indicaciones del fabricante. Los resultados fueron obtenidos por lectura espectrofotométrica a 450 nm.
Criterio serológico de clasificación de caso³
Títulos de anticuerpos Ig G4 < 40, fuente posvacunal; títulos de anticuerpos Ig G4 > 40, fuente natural.
Análisis de datos
Los resultados fueros expresados con un 95% de intervalo de confianza (IC) y para el análisis de datos se empleó la prueba de χ².
Resultados
En la tabla 1 y la figura 1 se muestra el cierre de los casos por criterio clínico-epidemiológico y por serología de título de anticuerpos Ig G4 de los grupos 1 y 2.



Los sueros de individuos sin antecedentes de vacunación tuvieron títulos de Ig G4 específica entre 1/80 y 1/160. Por el contrario, los sueros de individuos con antecedentes de vacunación presentaron títulos de Ig G4 específica para virus de sarampión entre 1/10 y 1/20.

Figura1. Sueros 1 - 6: grupo 1; sueros 7 - 12: grupo 2.

Bibliografía del artículo

1. Bellini JW, Rota JS, Rota PA. (1994) Virology of measles virus. The Journal of Infectious Diseases; 170 (suppl I); S15-23.
2. World Health Organization EPI (1990). Publication WHO/EPI/GEN/92.2 Geneva: World Health Organization, 1992.
3. Isa MB, Martínez L, Giordano M, Passeggi C, Wolf MC, Nates S. Comparison of immunoglobulin G subclass profiles induced by measles virus in vaccinated and naturally infected individuals. Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. Vol 9, N3:693-697; 2002.
4. Rossier E, Miller H, Mc Culloch B, Sullivan L, Ward K. (1991) Comparasion of immunofluorescence and enzime immunoassay for detection of measles, specific immunoglobulin M antibody. J. Clin. Microbiol. Vol 29. Nº 5. pág. 1069-1071.
5. Erdman DD, Anderson LJ, Adams DR, Stewart JA, Makowitz L, Bellini W. (1991). Evaluation of monoclonal antibody-based capture enzyme immunoassays for detection of specific antibodies to measles virus. Journal of Clinical Microbiology p1466-1471.
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